人高转移肝癌细胞 百欧博伟生物
-北京百欧博伟生物技术有限公司（biobw）是北京的一家专业于生物技术的研究与广泛运用及推广的高科技公司，位于北京企业林立的丰台区造甲街，生物技术推广及运用早于2011年开始，成立公司于2013年一月。本公司主要提供色谱耗材、色谱仪器、固相萃取装置、化学试剂、样品瓶、氘灯、标准品、微生物技术、菌种保藏服务以及ATCC产品代理等产品及服务。
一、细胞简介
平台编号：bio-73217
拉丁属名：H-97
细胞名称：H-97 （人高转移肝癌细胞）
种属：人
年龄（性别）：
组织来源：肝癌
生长特性：贴壁
细胞形态：上皮细胞样
生长培养基：DMEM高糖(货号:PM150210)＋10% FBS(货号:)＋1% P/S(货号:PB180120)
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃
二、人高转移肝癌细胞冷冻及保存方法
（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；
（2）HBL-100人整合SV40基因的乳腺上皮细胞存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。
HBL-100人整合SV40基因的乳腺上皮细胞培养方法如下：
1、将细胞稀释到1000个细胞/mL，接种到24孔板，每孔1ml。
2、接种后第二天在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选。
3、每隔3天跟换1次培养液，保持G418浓度不变。
4、选择出在10~14天内使HBL-100 人整合SV40基因的乳腺上皮细胞全部死亡的G418浓度来进行下一步的筛选试验。由于每种细胞对G418的敏感性不同，一般变动在100ug/ml～1000ug/ml范围。
HBL-100 人整合SV40基因的乳腺上皮细胞来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
三、人高转移肝癌细胞培养操作
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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