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青枯假单胞菌的保藏方法

  • 发布时间:2022-04-07 13:16:22
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    青枯假单胞菌

      青枯假单胞菌(Pseudomonassolanacearum)或称青枯菌,是引起许多重要经济作物如烟草、花生、番茄等植物的萎焉病。

      一、菌种简介

      菌株名称:青枯假单胞菌

      拉丁属名:PseudomonasSolanacearum

      规格:冻干物

      培养基编号:TM

      培养温度:30℃

      培养时间:48小时

      用途:蕃茄

      注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用产品信息以出库为准

      二、培养基

      TM培养基

      蛋白胨10g干酪素水解物1g

      葡萄糖5g琼脂20g

      蒸馏水1000mlPH7.0

      三、保藏条件

      培养物和安瓿冻干菌种应在2-8°C保存。西林瓶请放-20°C保存。甘油请置于-80度。

      四、注意事项

      1)冻干粉首次活化,干粉要全部用完,不能预留,用无菌吸管吸取0.3ml的培养液(即以上建议的培养基配方,不加琼脂)或者无菌水,滴入冻干管中,轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液,接种在培养基上(建议不超过2支平板或者斜面);

      2)经过冷冻干燥保藏,菌种处于休眠状态,复苏培养时可能会延迟生长,这时需较长的培养时间;若您收到的是已复苏的培养物(非冻干菌),则可以直接用于您的实验,或根据需要转接培养如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;

      3)微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;

      4)菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;

      5)应根据菌种状况及时转接,冻干菌种保藏时间通常为2-25年;

      6)菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和质粒载体网联系。

      7)如若有菌种复苏不活或者污染等情况,请在收到菌钟后2个月内联系,逾期不予受理;

      8)打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。

      9)安瓿瓶开封:用浸过75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍,并保持在火焰旁操作。

      10)甘油管使用:使用本甘油菌时可以不用完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用,但随着冻融次数的增加,细菌的活力会逐渐下降。

      五、保藏方法

      1、传代培养保藏法

      又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。

      2、液体石蜡覆盖保藏法

      是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。

      3、载体保藏法

      是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保法应用相当广泛。

      4、寄主保藏法

      用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

      5、冷冻保藏法

      可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。

      6、冷冻干燥保藏法

      先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。

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