这个Abraxisβ-N-甲基氨基-L-丙氨酸(BMAA)ELISA检测试剂盒适用于定量检测水样中β-N-甲基氨基-L-丙氨酸(BMAA)的含量。本试剂不适用于临床诊断。
安全性说明
试剂盒中的标准溶液含有少量的BMAA。另外,底物溶液含有四甲基联苯胺,终止溶液含有稀硫酸。要避免皮肤和底物溶液、终止液接触。如果不小心接触的话请用清水冲洗。
储存和稳定性
这个Abraxisβ-N-甲基氨基-L-丙氨酸ELISA检测试剂盒应该置于4–8°C保存。在使用前要提前拿出来回复到室温(20-25°C)。在有效期内都可以使用。
原理
这个Abraxisβ-N-甲基氨基-L-丙氨酸ELISA检测试剂盒是基于通过特异性抗体识别BMAA的直接竞争酶联免疫反应。当样品中含有β-N-甲基氨基-L-丙氨酸时,并且BMAA-HRP类似物竞争兔抗BMAA的结合位点抗体在溶液中,然后将BMAA抗体与第二抗体(山羊抗兔)固定在微量滴定板的孔上。在洗涤步骤和加入底物溶液后,产生了一个颜色反应。加入反应终止液后使颜色由蓝色变为黄色;在450nm波长进行检测,样品中的β-N-甲基氨基-L-丙氨酸浓度与吸收光强度成反比。
试剂盒的局限性和可能的交叉反应
对在水样中经常出现的多种有机物和无机物已近作过检测对此试剂盒并无干扰。由于化合物的易变质性由基质反应引起的干扰是不可能完全避免的。发现以下物质的存在对BMAA试剂盒没有显着影响:硫酸锰和氧化铝高达10,000ppm;氯化钙和硫代硫酸钠可达1000PPM;磷酸钾,硫酸亚铁和硫酸锌至100ppm;氯化铜,硫酸钙,硫酸镁,氟化钠和硝酸钠至多10ppm;氯化钠至1 ppm;胡敏酸和氯化镁高达0.1 ppm;甲醇达1%;和海水高达10%。操作不当可能导致检测结果错误,比如:试剂盒保存条件不对、错误的加液顺序、试剂的量没有加准确、孵育的时间太长或太短、孵育的温度太高或太低。操作过程不易在强光下进行。和其它检测方法一样对阳性结果要求通过其它传统的方法来验证。
测定的重要性
β-N-甲基氨基-L-丙氨酸(BMAA)是由几种类型的蓝细菌产生的非蛋白质氨基酸。当摄入时,BMAA会破坏并最终破坏运动神经元导致ALS患者出现相同类型的损伤,并引起脊髓神经原纤维缠结脐带和脑,类似于阿尔茨海默病中所见。那些遭受这种BMAA引起损害的人是归类为患有肌萎缩侧索硬化/帕金森综合征痴呆综合征(ALS/PDC)。症状ALS/PDC包括ALS的肌肉麻痹程度,帕金森病的肌肉僵硬程度和阿尔茨海默病痴呆并最终导致死亡。通过摄入受污染的饮用水或食物,人类可能会接触BMAA。饮用水可能通过在饮用水源中产生BMAA的蓝细菌的增殖而被BMAA污染,如湖泊和水库。目前还不清楚水处理的各种方法是否能够去除BMAA来自饮用水供应。暴露也会彻底摄入诸如苏铁种子等植物的食物,已知BMAA的蓝细菌生活并因此污染植物及其种子,并通过植物摄入食用含有植物或蓝藻的毒素的鱼类或其他动物。这是一个例子,20世纪50年代关岛出现了生物放大,当时食用苏铁种子的果蝠被原籍查莫罗人食用引起ALS/PDC病例急剧增加,在关岛被称为“裂解物”。BMAA ELISA允许重复测定42个样品的分析。少于1毫升的样本是必需的。测试可以在大约2小时内完成。
性能数据
灵敏度:BMAA(95%B/B 0)的定量限为约4ng/mL。 中间的测试(50%B/B 0)约为100ng/mL。确定更接近中间的校准曲线给出最准确的结果。样品浓度可以针对需要下限的样品进行检测(可根据要求从Abraxis获得技术公告)。