鸭禽流感病毒IgG抗体检测试剂盒

鸭禽流感病毒IgG抗体检测试剂盒

一、产品名称

通用名：鸭禽流感病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Diagnostic Kit for Duck Antibodies to Avian Influenza Virus (ELISA)

二、包装规格   96T×1/盒、96T×2/盒

三、预期用途   禽流行性感冒简称禽流感是由禽流感病毒（Avian influenza Virus，AIV）引起的一种从呼吸系统到全身败血性的急性、高度至死性传染性疾病。

本试剂盒适用于鸭血清中禽流感病毒特异性抗体的检测，可用于禽流感（全病毒）疫苗免疫效果评价。

四、试剂盒原理

本试剂盒系由预包被禽流感病毒（AIV）抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测鸭血清或血浆中禽流感病毒特异性抗体。实验时，在酶标板中加入对照血清和稀释的待检血清，经温育后，若样品中含有禽流感病毒的特异性抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有特异性抗体。

五、试剂盒组成

酶标板、酶标记物、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液A、底物液B、阳性对照、阴性对照

六、储存及有效期

于2～8℃避光保存，有效期为12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

七、适用仪器  含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

操作步骤

一、样品准备

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清按100倍稀释（如2μl血清加入198μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。

二、检验方法  

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

4.混匀，置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。

6.每孔加酶标记物50μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。

结果分析

实验正常的情况下，阴性对照≤0.15，阳性对照≥0.3。

二、检验结果的解释  

1.C.O（临界值）=2.1×阴性对照孔均值（阴性对照孔均值低于0.08时以0.08计算）。

2.未曾免疫鸭鸡群：样品A值≥C.O为阳性；样品A值＜C.O为阴性。

3.免疫鸭群：监测并记录样本当时的抗体水平，根据结果分析抗体水平的分布及鸡群免疫状态的动向。