产品介绍:CAS号分子式:C2H6N4S,分子量白色结晶粉末,熔点115-120℃,用于变性裂解细胞;提取RNA和DNA,无RNA酶和DNA酶活性,强蛋白变性剂,是苏州亚科化学的优势产品。文章介绍了专利型异硫氰酸胍法提取同时提取DNA病毒和RNA病毒核酸。
异硫氰酸胍法提取同时提取DNA病毒和RNA病毒核酸
随着分子生物学的快速发展,基因诊断成为检测动物疫病最准确而有效地手段,进行基因诊断的过程中,病毒核酸的提取是进行检测的前提条件,核酸提取的质量也影响检测的准确性。
当前,动物病毒核酸提取方法主要有经典Trizol提取法和以Trizol作为裂解液的硅胶模柱式提取法两种方法。经典Trizol提取法过程繁琐、周期长、提取效率低、技术要求高,以Trizol作为裂解液的硅胶模柱式提取法成本较高、提取RNA的质量不高、且只能提取RNA病毒。
一种同时提取血清、双拭子中动物DNA病毒和RNA病毒核酸的方法,包括步骤:对待提取物使用异硫氰酸胍裂解液裂解;硅胶膜吸附RNA;洗液Ⅰ除去杂蛋白;洗液Ⅱ洗去杂质;DEPC水洗脱核 酸;上述异硫氰酸胍裂解液包括3-7M异硫氰酸胍TriTonmM Tris-Cl、5-15mM DTT、60-90μg/mL蛋白酶K、10-30mM EDTA,PH在
上述洗液Ⅰ包括5-6M盐酸胍,53-59%无水乙醇,K70-90μg/mL蛋白酶,PH在上述洗液Ⅱ包括70-80%乙醇。
进一步地,上述异硫氰酸胍裂解液包括5M异硫氰酸胍、0.8%TriTon-100、40mM Tris-Cl、10mM DTT、80μg/mL蛋白酶K、20mM EDTA,pH在4.5。进一步地,上述洗液Ⅰ包括5.5M盐酸胍,56%无水乙醇,80μg/mL蛋白酶K,PH在6.5。进一步地,上述洗液Ⅱ包括75%乙醇。
上述操作步骤包括:
(1)取一干净离心管,100μL样品加入200μL的异硫氰酸胍裂解液中,振荡混匀,放置5分钟。
(2)加入与异硫氰酸胍裂解液等体积的无水乙醇,即200μL,颠倒反复混匀15秒。
(3)将过滤柱套在2mL收集管上,全部混合液移到过滤柱上,12,000rpm离心1分钟。
(4)弃收集管内的液体,往过滤柱加入600μL的洗液1,12000rpm离心1分钟。
(5)弃收集管内的液体,往过滤柱加入600μL的洗液2,12000rpm离心1分钟,再重复一次。
(7)弃收集管内的液体,过滤柱套在收集管上,12000rpm离心1分钟;
(8)换新的1.5mL离心管套上过滤柱,加20μLDEPC到过滤柱膜上,室温放置1分钟,12,000rpm离心1分钟,收集滤液,保存。